Janet Margolin urodziła się w 1943 r. w Nowym Jorku. Piękna, długowłosa brunetka zabłysła w roli nastolatki w sztuce "Daughter of Silence", broadwayowskim przedstawieniu nominowanym do nagrody Tony.
Sukces ten był przepustką do świata filmu, zachwyciła krytyków swą pierwszą rolą, zakochaną schizofreniczką w Dawidzie i Lisie (David and Lisa, 1962).
Delikatny, ujmujący prawdą psychologiczną film mógł stać się dla Janet przepustką do wielkiej kariery, tak się jednak nie stało. Grała drugoplanowe role w takich filmach, jak: Bus Riley's Back in Town (1965), The Greatest Story Ever Told (1965), czy Nevada Smith (1965).
Z tego okresu można wyróżnić rolę w Enter Laughing (1967) i Take Money and Run (1969) Woody Allena, potem Janet grała raczej w TV. Allen przypomniał sobie o niej przy okazji Annie Hall (1977).
Po pierwszym, dwuletnim nieudanym małżeństwie, aktorka poślubiła Teda Wassa, aktora i reżysera telewizyjnego. Margolin zmarła w wieku 50 - ciu lat na raka.