Ciekawostki
Błędy w grze
Kolor oczu Pantasilei zmienia się podczas rozgrywki: jest albo niebieski, albo zielony.
We włoskiej wersji językowej gry Juan Borgia przedstawia się kurtyzanom jako "Giovanni Borgia".
Choć Lukrecja Borgia jest jedną z przeciwniczek Ezio, w bazie danych Animusa pojawia się jako jego sojuszniczka.
Gdy Ezio trzyma Micheletto w swoich ramionach, ma on na sobie kostium ze sztuki "Pasja". Jednak gdy asasyn puszcza go wolno, odzienie zmienia się na zwyczajowe ubranie. Przystawia mu również do gardła prawe ukryte ostrze - nawet wtedy, gdy nie kupił go wcześniej u Leonardo.
Po zabiciu Gaspara de la Croixa, Ezio zamknął mu oczy jak wszystkim innym swoim celom, mimo że nosił on okulary.
Przed pierwszym skokiem w podziemiach Monteriggioni Lucy ściąga buty i odkłada je na bok. Gdy wraz z Desmondem dociera do kryjówki, ma je z powrotem na sobie, choć nie mogła ich założyć.
Kolor oczu Cristiny zmienił się na brązowy. W kilku wspomnieniach jej oczy pozostały jednak niebieskie.
Sekwencja 3: W wersji na PS3 La Volpe mógł być obecny w dwóch miejscach na raz - po uratowaniu Claudio jednocześnie siedział na ławce przed siedzibą Gildii Złodziei i stał na dachu budynku, z którego wraz z Ezio zaczął śledzić Macchiavellego.
Pozostałe
Po misji, w której Ezio udało się zwerbować trzy frakcje, Machiavelli pyta go jak tego dokonał. Ezio odpowiada tylko: "Virtu". Cnota virtù (czyli inicjatywa, decyzyjność i szybkie działanie) staje się później głównym elementem w filozofii Machiavellego.
Pod koniec 7 sekwencji Machiavelli mówi do Ezio: "Chciałbym napisać książkę o tobie któregoś dnia". Ezio odpowiada: "Jeśli to zrobisz, niech będzie krótka." Jest to nawiązanie do zwięzłego traktatu politycznego "Książę", w którym Machiavelli opisuje cechy idealnego władcy.
Na biurku Shauna Hastingsa stoi portret Cesare Borgii.
W pewnym momencie rozgrywki Lucy gra w przeglądarkową grę "Assassin's Creed: Project Legacy".
Hasło do skrzynki mailowej Lucy to Juno57. Jak na ironię, to właśnie Junona (ang. Juno) kazała Desmondowi ją zabić.
Sposób, w który Ezio trzyma rannego Pietro Rossiego - odgrywającego rolę Jezusa - jest niemal identyczny jak ukazany w rzeźbie "Pietà" Michała Anioła.
Jeśli Ezio spojrzy na Pietro Rossiego odgrywającego rolę Jezusa wzrokiem orła, korona cierniowa aktora zaświeci się na złoto.
Gdy Ezio szuka źródła tajemniczego głosu, zauważa pudełko i myśli, że ktoś się w nim schował. Nie dość, że całkowicie nie pasuje ono do epoki, to jeszcze ma na sobie znak towarowy gry "Metal Gear".
W grze można odblokować skórkę postaci Raidena z gry "Metal Gear Solid 4: Guns of the Patriots".