Wystarczył jeden letni obóz teatralny, żeby Matthew Morrison odkrył w sobie chęć zostania aktorem. Na początku uczęszczał do Orange County High School of the Arts, a po jej ukończeniu dostał się do Tisch School of the Arts, należącej do New York University. Pomimo, że regulamin uczelni zabraniał studentom pierwszych dwóch lat chodzenia na przesłuchania, to Matthew znalazł sobie agenta i wkrótce porzucił NYU. Zadebiutował w musicalu "Footlose", jednak potem na krótko dołączył do boy bandu LMNT. Po powrocie na Broadway wystąpił w "The Rocky Horror Show", aczkolwiek wielki przełom w jego karierze nastąpił wraz z rolą Linka Larkina w "Hairspray".
Po tym sukcesie przyszedł czas na jego debiut telewizyjny i filmowy. Początkowo otrzymywał małe role w takich produkcjach jak "
Seks w wielkim mieście" i "
Nocny kurs". Jak sam powiedział, jego ulubiona rola telewizyjna była w musicalu "
Once Upon a Mattress", gdzie wystąpił u boku
Carol Burnett. Był nominowany do nagrody Tony za musical "The Light in the Piazza", ale pod koniec 2005r. zrezygnował z dalszego uczestniczenia w tym przedstawieniu. Od 2009r. gra nauczyciela hiszpańskiego - Willa Schuestera, w serialu "
Glee".