Miriam Margolyes początkowo pracowała w radiu, gdzie udzielała swego głosu najróżniejszym postaciom - od małych chłopców do starych dam. Po studiach w Cambridge, zatrudniła się w radiu BBC. Następnie zaczęła się pojawiać w radiowych i telewizyjnych reklamach, by w końcu rozpocząć przygodę z kinem. Początkowo grała niewielkie epizody w filmach, aż wreszcie dostała pierwszą prawdziwą rolę. Po niezwykle udanym występie w filmie Christine Edward "Little Dorrit", przeprowadziła się do Stanów Zjednoczonych. W roku 1994 Margolyes zdobyła nagrodę BAFTA dla najlepszej aktorki drugoplanowej za rolę w filmie Martina Scorsese "Wiek niewinności". Dzięki tej kreacji zaoferowano jej wstąpienie do Amerykańskiej Akademii Filmowej. Największą miłością aktorki jest jednak teatr (wystąpiła ostatnio w "The Vagina Monologues").
Zagrała m.in. w takich przebojach kinowych jak "Sklepik z horrorami", "Wieczna miłość", "Babe - świnka z klasą", czy "Romeo i Julia".
W filmie "Harry Potter i komnata tajemnic" wcieliła się w postać specjalistki od zielarstwa, profesor Sprout. 30 grudnia 2001 roku została odznaczona tytułem kawalera Orderu Imperium Brytyjskiego (Officer of the Order of the British Empire - OBE).